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蛋白质芯片技术又称蛋白质阵列,是指将已知的大量蛋白质固定在经化学修饰的固相载体上,在保留蛋白质物化性质的基础上,蛋白质与载体表面结合,再用激光扫描系统或者电感耦合器件获取相关图像;然后用专门的计算机软件分析图像、定性定量结果。Howell等采用俗称软蚀刻的微接触印刷技术制作出了一种可以大肠杆菌E.coli O157∶H7及鲑肾杆菌的抗体微阵列,结果表明:此芯片与其他有害微生物的交叉反应少,检出浓度为7×107cfu/ml,检测时间是40min,是一种很有效的微生物检测方法。
方珍建立了检测E.coli O157
H7的液相蛋白芯片方法。通过绘制检测曲线,分别应用该方法及H2O作溶解剂的液相芯片方法检测实际牛肉样品。比较该方法与分离培养法的阳性检出率,能检出阳性的低浓度为103cfu/ml,低检出限为100cfu/ml;与18种肠道菌无交叉反应,特异性良好;3次重复实验,批间变异系数7.61,重复性良好;应用该方法检测牛肉样品中人工添加,能检出阳性的低浓度为0.5cfu/ml;应用该方法检测154份实际牛肉样品,检出阳性样品19份,而培养法检出阳性样品16份。蛋白质芯片技术是一种高特异性、高灵敏度、高通量、重复性好、应用性强、适用范围广且微型化的分析技术,在生命科学的各个研究领域有很好的发展前景,但同基因芯片技术一样,费用高,发展还不成熟。
纳米金标记技术
纳米金标记技术是指直径在1nm—100nm金的微小颗粒,具有高电子密度,介电特性和催化作用,可以与多种生物大分子结合,且不影响生物大分子的生物活性。近年来,基于纳米金标记的检测研究在有害微生物方面应用比较多,检测的微生物种类也比较多,国内外科技工作者通过对纳米金颗粒表面特性的处理以及在纳米金颗粒表面标记上特定的寡核苷酸探针,开发研究出了新的微生物系统。
利用氨基偶联法在传感器表面固定多抗体作为一抗,金纳米粒子标记的大肠杆菌E.coli O157∶H7的多抗体作为二抗,通过三明治方法用双通道表面等离子体共振传感器对E.coli O157∶H7进行检测。SPR直接法检出限为103cfu/ml,线性范围为103cfu/ml—109cfu/ml;金纳米粒子增强三明治法的检出限为10cfu/ml,线性范围为10cfu/ml—1010cfu/ml,灵敏度提高100倍,检测范围更宽,检测时间缩短,选择性和重现性较好。此技术具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、**、样品所需量少等优点,适合现场筛选,在饲料检测中有着广泛的应用价值和发展前景。
目前,生物学领域的*通过对微生物检测方面深入的研究,开发了一系列技术,有ATP荧光仪、多功能微生物荧光检测仪、微生物实时光电检测系统、纸片法。这些用于食品中有害微生物的检测技术,未来同样可以在饲料中应用,这些方法的应用将为饲料安全提供有力的**,同时可以促进我国饲料工业的持续健康发展。下面重点介绍常用的两种有害微生物检测设备。
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